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以下這些Waters液相色譜柱的選擇方法你一定要記住
發布時間:2019-12-26   點擊次數:657次
   Waters液相色譜柱的選擇方法概述:
 
  1、填料的種類:
  填料的基質一般選擇使用多孔矽膠或聚合物等,在細孔的表麵有多種經過化學修飾的官能團。
  利用目標成分疏水性的不同起到分離效果的反相分離模式,利用極性不同進行分離的正相分離模式,根據分子大小的不同而分離的尺寸排阻模式,根據離子性質的不同而達到分離的離子交換模式,又或者分離光學異構體等,根據目的的不同,需要選擇對應的填料。
  作為填充劑的代表十八烷基、辛基、丁基等即在矽膠的細孔表麵化學鍵合的C18(ODS)、C8或C4等,碳鏈越長,疏水性越強。
 
  2、填料孔徑:
  多孔矽膠為基體的填料表麵具有無數的細孔,需要根據目的成分的分子量選擇對應大小的填料孔徑。微孔徑100?(10nm)對應5000左右的分子量。分子量大於5000的,可以選擇300?(30nm)或以上的大孔徑柱子。目的成分能夠進入孔的話,才能與官能團相互作用從而起到分離的效果。對於大分子蛋白質或聚合物等高分子,如果不是大孔徑的基體,與官能團的相互作用就會減少。另外,分析低分子時,選擇太大的微孔,由於會擴散故導致峰型可能會展寬。
 
  3、Waters液相色譜柱尺寸(內徑):
  一般通用的HPLC柱內徑為4.6mm,LC/MS內徑多為2.1mm,毛細管HPLC色譜柱為不滿1mm,製備HPLC色譜柱6.0mm以上。通用HPLC係列,內徑不同得到的結果也不同。即使改變內徑,根據色譜柱的截麵積比改變相應的流速,保留時間基本不會改變。特別是對於像UV、RI一樣對於濃度要求很高的檢測器而言,流速越小,其對應的靈敏度也越高。需要注意的是,通用型HPLC色譜柱內徑太小,裝置的死體積影響變大,峰型會變寬。並且根據HPLC係統使用目的的不同種類也不同,能夠設定的正確的流速與流速範圍,係統響應等也會不同,所以根據係統不同選擇對應的內徑是十分重要的。
 
  4、Waters液相色譜柱尺寸(長度):
  一般使用較多的色譜柱的長度,通用型,製備HPLC柱長度為150~250mm,LC/MS為100-150mm,超快速HPLC(UHPLC)為50-100mm。Waters液相色譜柱長度越長理論塔板數也越高。隻是,需要注意,色譜柱長度加倍後,分析時間與使用壓力也會加倍。對於2μm或者3μm的微粒子,分離度和理論塔板數都較好時,將色譜柱的長度變短,可以縮短分析時間,進行快速分析。
 
  5、接頭形式:
  Waters液相色譜柱的接頭根據廠家的不同也會有不同。一般分析色譜柱是1/16英寸外徑的管子使用螺絲進行連接,若連接不同的接口,較易產生死體積與漏液現象。
  特別對於不鏽鋼的配管等,需用套圈固定管子,就必須選擇對應的接口形式。
  接口形式和螺距有英寸螺距和毫米螺距兩種。一般Waters接口型使用比較普遍。無論是HPLC或UHPLC,通過選擇適當的色譜柱接口形式,InertSustain以及Inertsil的性能能夠充分的發揮。
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